共聚焦显微镜课件.ppt

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文档介绍

显微镜成像清晰度的决定因素: 1.分辨率 2.球差 3.色差 1、分辨率: 指显微镜能将近邻的两个质点分辨清楚的能力,通常是用显微镜所能分辨清楚最近的相邻两点间的距离来表示。 人眼及各类显微镜的分辨率 人眼分辨率: 0.20 mm 光学显微镜分辨率: 0.25 mm 共焦显微镜分辨率: 0.18 mm 电子显微镜分辨率: 0.20 nm 在显微镜基础上配置激光光源,扫描装置,共扼聚焦装置和检测系统而形成的新型显微镜。 利用共聚焦光路和激光扫描获得生物样品的显微断层图象,动态扫描记录、图像处理及三维立体构建、成份分析等软件。 激光共聚焦显微镜构成 共聚焦显微镜的特点 光源 共聚焦技术 点扫描技术 信号放大 电子图像 软件 共聚焦显微镜的应用 高清晰成像 半定量荧光强度分析 荧光探针表达量测定 分层扫描 多种荧光标记同时检测 荧光标记物绝对定量分析 扩展应用 高清晰成像 激光共聚焦显微镜因使用共扼光路使非焦平面的光线被抑制,减少了成像的干扰,以及使用光色较纯的激光,所以成像分辨率可达普通光学显微镜的1.4倍。 可以清晰的表现某些细微结构。 透射光扫描(DIC) 利用激光透射扫描成像,用特殊滤光片达到相差显微镜的效果,可获得清晰的具有立体感的图片 半定量荧光强度分析 荧光信号通过光电倍增管转化为电信号,经过电脑分析可对荧光信号进行相对定量测定。 细胞中特异性荧光标记的蛋白在不同药物环境和不同培养时间条件下的表达差异。 荧光探针的特异性标记:即荧光强度与特异性标记蛋白的表达量成正相关。 随机选择细胞或区域,测定其荧光强度值,并进行统计分析。 半定量荧光强度分析 半定量荧光强度分析 荧光表达量测定 利用荧光与透射光同时扫描,观测相等面积内不同组间荧光标记蛋白表达的差异。 荧光表达量测定 分层扫描(切片扫描) 按共扼聚焦的原理,通过调节针孔的大小,可控制样品扫描层面的厚度。即样品中相当

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