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精品教学课件设计 | Excellent teaching plan 悬浮细胞传代及细胞计数

一、 细胞传代

实验目的： 掌握悬浮细胞传代技术。进一步掌握细胞培养的操作技术。

实验原理：

培养细胞生长一定时间后， 需分离再培养， 否则细胞因生存空间不够， 细胞密度

过大，致营养不足而引起细胞衰老、 停止生长甚至死亡。 为了维持细胞的存活和

生长，必须进行再培养，即将原培养瓶内细胞分离、稀释、接种到新培养瓶内继

续扩大培养。

实验用品： （一）仪器 净化工作台、离心机、恒温水浴箱、冰箱（ 4 ℃、 -20 ℃、 -70 ℃）、倒置

相差显微镜、培养箱； （二）玻璃器皿 吸管（弯头、直头）、培养瓶、废液缸、 （三）塑料器皿 吸头、枪头、胶塞、移液管、 15ml 离心管、离心管架 （四）其他物品 微量加样枪、计数板、记号笔、移液枪 （五）试剂 1640 培养液、 PBS

操作步骤：

1. 准备： 打开培养液， PBS； 取出离心管，拧开管盖，管盖倒放。从吸管筒中依次取出吸管，装上吸 头，插入离心管备用。

2. 从培养箱内取出细胞，放在显微镜下观察其生长状态、密度。

3. 首先观察培养板孔中培养液量。 用吸管分别吸出两个孔中的细胞连同培养液， 转入离心管中。再另取一只吸管吸取 PBS，放入培养板孔中，轻轻吹打孔壁， 精品教学课件设计 | Excellent teaching plan 吸出转入离心管。

4. 离心，设置离心机 1000 转/ 分， 4-5 分钟。

5. 取出离心管，轻轻吸出上清，倒入废液缸。吸取培养液约 7ML放入离心管， 轻轻吹打细胞，使之均匀悬浮。

6. 吸取 1ML细胞悬液 1ML转入 EP管中，备计数用。

7. 其余的细胞分别放入六个孔中，每孔约 1ML。

8. 吸取培养液加入板孔中至 1/3 孔容量。

9. 镜下观察细胞是否分布均匀，放入培养箱培养。