基因工了程载体.ppt

基因工程载体;;;载体;Characteristics of vectors for gene cloning;;基因工程克隆载体，必须具备以下条件：;5.1 质粒载体（plasimid vectors）; （一）质粒的生物学特性; （一）质粒的生物学特性;; 抗菌素名称 抗菌素作用方式 宿主菌抗性机理; （一）质粒的生物学特性; （一）质粒的生物学特性;（一）质粒的生物学特性;;（二）质粒DNA的制备;（三）质粒载体的改造-策略;pBR322的构建;1.质粒pBR322;pBR322质粒的优点：

（1）具有较小的分子量 4363bp，2.6×106Da，

（2）具有两种抗菌素抗性基因可供作转化子的选择记号。

（3）具较高的拷贝数，而且经过氯霉素扩增之后,每个细胞中可累积1000～3000个拷贝。

（4）对多种常见的限制性内切核酸酶只含有一个能切割的位点。 ;;（1）四环素：;如果在Tetr上插入外源DNA，导致四环素抗性基因失活，可用四环素加环丝氨酸平板培养基选择重组克隆。;;;（2）氨苄青霉素抗性插入失活选择过程;;2. pUC质粒载体;pUC18 / 19： ;;?-互补 (alpha-complementation) 大肠杆菌?-半乳糖苷酶可以和其底物X-Gal 相互作用并且释放出一种蓝色物质，当该酶的?-片段和?-片段分开时就失去了这种显色的功能。通常将编码该酶?-片段的LacZ’ 基因插入到载体的多克隆位点的侧翼序列中，而在一些人工构建的大肠杆菌株系中却只能编码产生该酶的?片段。这样一来，含有功能性完整的LacZ’ 基因的载体导入到这类寄主细胞中时，载体编码的 ?-片段就能和寄主编码的?片段发生互补并具有了对底物X-gal的作用功能（发生显色反应），这种现象被成为是 alpha-complementation.