pET表达载体中文手册.pdf

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文档介绍

pET System Manual

第 10版pET系统操作手册于2002年7月修订完成。Novagen一直致力于研制开发pET系统，并将 pET系统的新进展

编入本手册。欲获取 pET系统的任何最新资讯，请随时登录Novagen网站www.novagen.com。

内容提要 内容提要 1 I. 系统介绍 4 A. 概况 4 B. 使用许可及协议 4 C. 系统组成 4 D. 选择合适的pET 载体 4 基本考虑因素 5 蛋白溶解性及细胞定位 5 融合标签 5 各种pET 载体特性列表 7 E. pET 载体克隆策略 8 制备不带融合标签的天然蛋白 8 制备以蛋白酶切去融合标签的天然蛋白 9 不需连接反应的克隆方法(LIC) 9 F. pET 系统蛋白表达的调控 10 T7lac 启动子 10 pLysS 和pLysE 宿主菌 10 载体与宿主菌共同影响表达水平 10 含葡萄糖的培养基 11 pLacI 宿主菌 11 pETcoco™ 系统 11 G. 用于克隆的宿主菌 11 H. 用于表达的宿主菌 12 蛋白酶缺陷型 12 调节培养体系中所有细胞的表达水平 12 二硫键的形成及增加蛋白可溶性 12 补充稀有密码子 13 硒代甲硫氨酸标记 13 pET 系统各种宿主菌特性列表 14 I. 抗生素抗性 16 J. CE6 噬菌体 16 K. 诱导对照 17 II. 建立原核表达体系的基本知识 18 A. pET 系统操作流程 18 B. 生长培养基 19 C. 菌株保存 20 D. 制备载体 21 E. 制备插入片段 22 III. 目的片段克隆 23 A. 连接反应 23 B. 转化 23 操作小诀窍 23 操作步骤 24 铺板技术 25

默克中国 操作手册TB055 第 10 版 1

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