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土壤酶活性测定方法

一、蔗糖酶: 3，5-二硝基水杨酸比色法

1. 试剂配制

2N氢氧化钠200mL：称取16g 氢氧化钠，用蒸馏水溶解，定溶于200mL容量瓶中。

3，5-二硝基水杨酸溶液 1000mL：称5g二硝基水杨酸，溶于200mL2N氢氧化钠和500mL蒸馏水中，再加300g酒石酸钾钠，用蒸馏水稀释至1000mL（不超过7天）。

1/15M 磷酸氢二钠1000mL：23.867g Na2HPO4·12H2O溶于1000mL蒸馏水中。

1/15M 磷酸二氢钾 1000mL：9.078g KH2PO4溶于1000mL蒸馏水中。

pH5.5磷酸缓冲液100mL：5 mL磷酸氢二钠(1/15M)加95mL磷酸二氢钾(1/15M)

8%蔗糖1000mL：称取80g蔗糖，用水溶解，稀释至1000mL。

甲苯。

标准葡萄糖溶液（1mg/mL）1000mL： 取少量葡萄糖在真空干燥箱中，于55℃条件下真空干燥至恒重。然后取1.00g葡萄糖溶于100ml蒸馏水中成标准葡萄糖母液（10mg还原糖/ml）。取此母液10ml, 用蒸馏水定容至100mL即成标准葡萄糖液（1mg/ml）；

2. 操作步骤

（1）标准曲线绘制：分别取标准葡萄糖液 0.4mL，0.8 mL，1.2mL, 1.6mL, 2.0mL,2.8mL, 3.2mL于50 mL比色管中，另取一管做空白对照。用蒸馏水补足至10mL。加入3.0mL 3，5-二硝基水杨酸，沸水浴5min，随即在自来水流下冷却。最后用蒸馏水稀释至50mL，并在分光光度计上于波长508nm处进行比色。

比色后，以光密度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线。