分子生物学实验.ppt

分子生物学实验;实验目录;实验一 植物基因组DNA提取;4.核酸是生物有机体中的重要成分，在生物体中核酸通常与蛋白质结合在一起，以核蛋白的形式存在。核酸分为DNA和RNA，在真核生物中，前者主要存在于细胞核中，后者主要存在于细胞质和核仁里。在制备核酸时，通过研磨破坏细胞壁和细胞膜，使核蛋白被释放出来。;5. 植物基因组DNA的提取程序： （1）破碎组织 （2）破坏细胞膜 （3）去除杂质 （4）沉淀基因组DNA;6. DNA的检测方法 （1）紫外分光光度法 （2）电泳检测DNA的质量 ;本实验是通过SDS法提取拟南芥基因组DNA。;

1.通过SDS提取拟南芥基因组DNA;

2.为从拟南芥基因组DNA克隆目的基因作准备;仪器及耗材： 研钵、微量移液器及吸头、EP管、台式离心机。

材 料： 拟南芥小苗

试 剂： DNA Extract Buffer (0.2M NaCl, 25mM EDTA, 0.5% SDS, pH 7.5); 70%乙醇；酚；氯仿；异丙醇;RNase

;实验步骤;9.在溶解DNA中加入3-5 μl RNase，37℃消化2-3h；

10.补充ddH2O至总体积400 μl ，加入等体积的酚/氯仿，混匀；

11.12000rpm，5min（RT），

12.取上清，加入1/10体积的乙酸钠和2倍体积的无水乙醇，-20 ℃放置10min;

13.12000rpm，4 ℃离心10min；

14.去上清，70%乙醇洗涤沉淀,12000rpm，4 ℃离心5min;

15.去上清，沉淀干燥后，加入20 μl ddH2O溶解DNA；

16.分光光度计法检测DNA的浓度和纯度。;实验报告分析;注意事项;思考题;实验二 PCR克隆目的基因;PCR原理