实验六抗体效价的Elisa测定 .pptx
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- 2021-12-02 发布|
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实验六 抗体效价的Elisa测定; 60年代初期,Averameas & Ram等
建立了免疫酶技术(immunoenzymatic techniques)
利用特别的交联剂研制出辣根过氧化物酶人血清白蛋白及酸性磷酸酯酶抗体,统称为酶标记物或酶结合物,用于抗原或抗体的示踪、定位或定量测定;酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay简称为Elisa)是在免疫酶技术(immunoenzymatic techniques)的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。本法兼有灵敏度高和特异性强两方面的优点。;1974年 Voller等
用聚苯乙烯微量反应板作为免疫吸附剂吸附抗体(???原),再与相应的酶标记物结合
操作更方便,易重复
灵敏度可高达ng(10-9g)至pg(10-12g),
;(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay);免疫标记技术;应用各种液相和固相免疫分析方法,对体液中的半抗原、抗原或抗体进行定性和定量测定;酶性能稳定、经济易得、底物无色、产物显色,便于检测
常用的酶:碱性磷酸酯酶、辣根过氧化物酶(horserad peroxidase简称HRP)、葡萄糖氧化酶、半乳糖苷酶等。;戊二醛法, 过碘酸氧化法
将酶与Ab交联在一起;图一 直截了当型Elisa;图二 间接型Elisa;图三 双抗体夹心型ELISA;图四 固相抗体竞争型ELISA
未知抗原量=A(1)-A(2);每次反应后都要反复洗涤?
保证反应的定量反应
防止重叠反应,引起非特异现象。;Partially purified, inactivated HIV antigens
antigens pre-coated onto an ELISA plate
Patient serum which contains antibodi