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基因工程实验报告 姓名： 杜琳颖 学号： 2017051141 学院： 生命科学院 专业： 生化与分子

一、实验目的 学习并掌握从目的基因克隆到蛋白质表达的实验流程及原理。

二、实验流程 实验一、质粒提取载体 DNA 提取及酶切鉴定

一、实验目的 学习质粒的酶切及电泳分析。

二、实验原理 质粒是一种染色体外的稳定遗传因子，具有双链闭环结构的 DNA 分子。它具有自主

复制能力，能使子代细胞保持它们恒定的拷贝数，可表达它携带的遗传信息。目前，经人

工改造的质粒已广泛用作基因工程中目的基因的运载工具 —— 载体。 质粒 DNA 的提取是依据质粒 DNA 分子较染色体 DNA 分子小，且具有超螺旋共价

闭合环状的特点，从而将质粒 DNA 与大肠杆菌染色体 DNA 分离。现在常用的方法有：

碱裂解法、密度梯度离心法、煮沸裂解法等。实验室普遍采用的碱裂解法具有操作简便、

快速、得率高的优点。其主要原理：利用染色体 DNA 与质粒 DNA 的变性与复性的差异

而达到分离的目的。在碱变性条件下，染色体 DNA 的氢键断裂，双螺旋解开而变性，质

粒 DNA 氢键也大部分断裂，双螺旋也有部分解开，但共价闭合环状结构的两条互补链不

会完全分离，当 pH=4.8 的乙酸钠将其 pH 调到中性时，变性的质粒 DNA 又恢复到原来

的构型，而染色体 DNA 不能复性，形成缠绕的致密网状结构，离心后，由于浮力密度不

同，染色体 DNA 与大分子 RNA 、蛋白质 -SDS 复合物等一起沉淀下来而被除去。 限制性内切酶可以识别双链 DNA 特定位点，并产生特异的切割，形成粘性末端或平

末端，这样有利于 DNA 片段再连接。限制性内切酶对环状质粒 DNA 有多少切点，酶切

后就能产生多少个片段。因此，鉴定酶切后的片段在电泳凝胶的区带数，就可以推断切点