临床聚合酶链反应试剂盒的选用和质检 .pptx

临床聚合酶链反应试剂盒

的选用和质检;　 PCR是在模板DNA、引物和四种脱氧核苷酸等存在的情况下,DNA聚合酶依赖的酶促合成反应,整个扩增过程分变性、退火、延伸三步。经过若干循环后使目的DNA得以迅速扩增。; PCR技术自1989年开始被应用于临床检验以来,以其快速、简便、灵敏等优点特别快地成为临床实验诊断学的一个技术热点、目前,临床PCR检验差不多广泛使用商品化、规范化的试剂盒 ;● PCR试剂盒的质量对测定结果的影响是直截了当而 且是至关重要的● 试剂盒的质量不但受到生产过程中质量控制 诸要素的影响,原材料的质量、方法学设计、包 装、运输和贮存等一系列的环节,都对试剂盒的 质量有决定性的影响 ; ● 如何选择质量好的且符合自己实验室要的试剂盒？ ● 如何保证拿到手里的试剂盒具有好的质量? ;　　　　PCR或RT-PCR试剂盒的组成 ●核酸提取试剂 ●核酸扩增或反转录－核酸扩增试剂 ●产物检测试剂 ;　影响PCR试剂盒质量的因素 ●标本处理(核酸提取)方法、用于核酸扩 增的原材料及方法学设计 ●运输和贮存中所存在的问题 ;　　　　　核酸提取方法 ●经典方法:酚－氯仿抽提法,提取效率高、纯度好,但过程繁琐,易增加标本间相互污染的机会●简便方法:煮沸裂解法、玻璃粉或硅吸附法等核酸提取除了要求操作简便外,更重要的是提取的效率及纯度,因此煮沸裂解法已被核酸纯化方法替代。 ; 核酸提取的效率及纯度的检测 使用已知阳性(包括病毒含量)的溶血和脂血血清标本,用试剂盒提供的标本处理方法提取核酸后扩增检测,与无溶血和脂血的血清标本比较,观察测定结果的差异,从而判断提取方法的优劣。 ; 核酸扩增所需的原材料 ●寡核苷酸引物　 ●扩增缓冲液 　 ●dNTP 　 ●Taq酶以及反转录酶等 ; 寡核苷酸引物和探针●引物和探针纯度对试剂盒的质量的影响 纯度的高???可依照260/28