基因操作豪原理04.ppt

;;2. 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）

优点: 分离率高 1 bp, 点样量高 10?g 回收的DNA纯度高

非变性: 迁移率与序列和组成有关

变性(尿素/甲醛): 无关，分离探针，S1酸产物分析，DNA测序;三、DNA片段的纯化（从agarose）

1.低熔点agarose电泳 gel + 5vol tris 65℃ 5min phenol extract ethanol

2.透析袋，电洗脱法 可用于?5kb

3.Glass Milk (bead) 3M NaI 溶液，bead吸附 洗涤 elute

4.Kit Qiagen 公司;一个典型哺乳动物细胞约含 10-5?g RNA，其中80-85%为rRNA(28S,18S和5S/23S,16S,5S)三种类型)，其余15～20%主要由各种类型的低分子量RNA组成（如tRNA，核内小分子RNA等）。

mRNA为总RNA的1～5%，3‘端有一个poly(A)尾，可与oligo(dT)-纤维素，吸附，亲和层析分离寡脱氧胸苷酸。;一、注意事项控制RNA酶的活性

(一) 实验用具和溶液的去RNA酶处理

1. 玻璃制品、塑料制品、电泳槽

一次性使用用品/第一次使用的用具，可稍作处理

器皿：180℃ 8hr or longer， 氯仿冲洗/NaOH/专用溶液 0.1% DEPC(焦碳酸二乙酯)、浸泡(37℃，2hr) (RNA酶的强列抑制剂，但不绝对) 无菌水(or DEPC水)洗涤 100℃烤15min→湿热灭菌;电泳槽: 洗净,水冲洗, 乙醇干燥 3%H2O2 10min 0.1% DEPC H2O 水洗

2．H2O：0.1% DEPC 溶液：用DEPC水配制 （注意有些药品，不能用DEPC,如Tris）

3．其它 如手套，保持干净、清洁

;（二）RNA酶抑制剂

1．蛋白质抑制剂 人胎盘RNase抑制剂