文档介绍
2、花粉预处理 低温处理花蕾，或单核后期离心预处理。 3、花粉分离 适合的花蕾-消毒-取出花药-烧杯壁中挤压花药-尼龙网过滤-花粉液离心-花粉粒沉淀-培养基稀释-纯净花粉群体。 花粉分离 花粉分离 花粉分离 花粉分离 将小孢子从花药里游离出来的主要方法有： 1)自然散落法 合适的花蕾消毒后→无菌条件下取出花药→接种在预处理液或培养基→花粉囊自动裂开→小孢子散落到培养基中→收集小孢子→用新鲜培养基培养。 2)挤压法 ①挤压法 消毒处理过的花药→置与无菌培养皿或烧杯中→加少量提取液→用注射器内管或一端压扁的玻璃棒轻压花药→花粉挤到提取液中→级联过筛→除去组织碎片→低速离心→沉淀→清洗几次→制成小孢子悬浮液用于培养。 ②研磨过滤收集法。与上法相似，区别是把消毒过的花蕾置与无菌的研钵中研磨，挤出小孢子。 3)机械游离法 ①磁搅拌法 将花药接种盛有培养液或渗透压稳定剂的三角瓶→放一根磁棒→置磁力搅拌器低速旋转至花药透明。 ②小型搅拌（超速旋切）法 4)小孢子分离和纯化 小孢子匀浆→ 过筛→离心收集 花粉培养方式 1）平板培养 花粉置琼脂固化培养基上培养，诱导产生胚状体，进而分化成植株。 2）液体培养 花粉悬浮在液体培养基中进行培养。 3）双层培养 花粉置固体-液体双层培养基上培养。 4）看护培养 配制好花粉粒悬浮液和琼脂固体培养基后，将完整的花药或花药的愈伤组织放在琼脂培养基上，将圆片滤纸放在花药或愈伤组织上，然后将花粉置与滤纸的上方。 5）微室培养 将花粉培养在很少的培养基中。 做法：①琼脂培养基②液体培养基 6）条件培养基培养 在预先培养过花药的液体培养基中或在加入失活的花药提取物的合成培养基中，接入花粉进行培养。 4、培养方法 培养基：我国朱至清N6适于禾谷类作物、庄家骏马铃薯2号、王培C17、欧阳文俊W14等。 高浓度的铵离子抑制花粉愈伤组织形成，活性炭、铁盐促进花粉分裂。生