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文档介绍

细菌染色技术

一、细菌的革兰染色法 革兰染色法 (Gram stain) 是细菌学上最经典的、使用最广泛的一种染色方法。由丹麦细菌学

家革兰 (Christian Gram)于 1883 年创立。细菌染色后,不仅可以观察其形态,而且可根据染色结 -

果将细菌分为两大类,即革兰阳性菌 (G+ 菌)和革兰阴性菌 (G 菌) 。

1、原理: + - (1)G 菌细胞壁结构致密 (肽聚糖层厚 ),且脂质含量少,乙醇不易渗入脱色; G 菌细胞壁结

构疏松 (肽聚糖层薄 ),且脂质含量多,乙醇溶解脂质后易渗入细胞而脱色。 (2)G+菌菌体含有大量核糖核酸镁盐,可与碘、结晶紫牢固结合,使已着色的细菌不被乙醇 -

脱色。 G 菌菌体内核糖核酸镁盐含量小,易被乙醇脱色。 + - (3)G 菌等电点比 G 菌低,在同一 pH条件下阳性菌比阴性菌所带阴电荷要多, 故与带正电荷

的碱性染料 (结晶紫 )结合牢固,不易被乙醇脱色。

2、应用 革兰染色法的实际应用意义有三: + - (1)按照革兰染色法可把细菌分为 G 和G 两大类; + - (2)G 菌和 G 菌的致病性不同,所致疾病各异; + - (3)对G 和G 菌,选择不同抗菌物治疗。

3、材料   (1)葡萄球菌和大肠埃希菌培养 18~24h 后的混合菌液。 (2)兰染色液:结晶紫染液、碘液、 95%酒精、稀释复红或沙黄染液。 (3)载玻片、接种环、酒精灯、吸水纸、显微镜等。

4 、方法 标本片制备 (1)载玻片准备: 取一张清洁载玻片, 用蜡笔在其背面画出二个有一定间隔、 直径约 1~2cm

的涂抹范围,用数字或符号做好标记。 (2)涂片:将接种环在火焰上烧灼灭菌,冷却后取菌液直接涂布在标记的涂抹范围内。接种

环在火焰上烧灼灭菌。 (3)干燥:涂片最好在室温下自然干燥,或将标本面向上,置于离酒精灯火焰约半尺高处缓

慢烘干,切不可放在火焰上

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