五年制生化课件重组dna技术.pptx

重组DNA技术

Recombinant DNA technology;主要内容;又称分子克隆（molecular cloning）或基因克隆（gene cloning) 技术或 基因工程（genetic engineering）。 指在体外将DNA片段与载体连接，形成重组DNA分子，在受体细胞中复制、扩增或表达蛋白质以及定向改造基因结构所用的方法及相关的技术。;2. 简史;基因重组生产人胰岛素路线;第 二节重组DNA技术中常用的

工具酶

;限制性核酸内切酶“DNA剪刀” *

DNA连接酶“缝纫针” *

聚合酶：DNA聚合酶I、DNA聚合酶I大片段（ Klenow片段）、Taq DNA聚合酶

DNA修饰酶：多核苷酸激酶、 碱性磷酸酶、末端脱氧核苷酰转移酶（末端转移酶）

反转录酶

;常用的工具酶;一、限制性核酸内切酶; Ⅱ型限制性内切酶，在基因工程技术中常用。特点：分子量小，仅需Mg2+作为催化反应辅助因子，它们能识别双链DNA的特异序列，并在这个序列内进行切割，产生特异的DNA片段。 Ⅱ类酶识别序列特点为回文结构，一般为4~6 bp（有些为8或8个以上碱基序列)，且富含GC。;第一个字母取自产生该酶的细菌属名，用大写斜体；

第二、第三个字母是该细菌的种名，用小写斜体；

第四个字母（有时无）代表株（可大写或小写）；

用罗马数字表示发现的先后次序。;E=Escherichia，埃希氏菌属

co=coli，大肠杆菌菌种

R=RY13，菌株名

I=第一个被分离到的内切酶;基本特性;2. 识别的核苷酸序列通常为回文结构（palindrome） ;;来源与识别序列不同，但切割DNA后，产生相同的黏端，称为同尾酶。;;6. 切割会受其他因素的影响 限制性内切酶通常不能切割在识别位点内有特异碱基甲基化的序列。 缓冲液或环境温度也会影响一些酶的特异性。