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2021/9/12 * （2）3,5－二硝基水杨酸（DNS）比色法测定还原糖 在碱性溶液中,DNS与还原糖共热后被还原成棕红色氨基化合物,在一定范围内还原糖的量与反应液的颜色强度呈比例关系,利用比色法可测定样品中的含糖量。 （3）苯酚硫酸比色法 苯酚－硫酸试剂可与多糖中的己糖、糖醛酸起显色反应,在490nm处有最大吸收,吸收值与糖含量呈线性关系。 2021/9/12 * （4）葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖 葡萄糖氧化酶专一氧化β－葡萄糖,生成葡萄糖酸和过氧化氢,再利用过氧化物酶催化过氧化氢氧化某些物质如邻甲氧苯胺使其从无色转变为有色,通过比色法计算葡萄糖含量。 葡萄糖溶液中α－葡萄糖和β－葡萄糖存在着动态平衡,随着β－葡萄糖的氧化,最终所有α－型全部转变成β－型被氧化。 （5）Nelson法 还原糖将铜试剂还原生成氧化亚铜,在浓硫酸存在下与砷钼酸生成蓝色溶液,在560nm下的吸收值与糖含量呈线性关系。 2021/9/12 * 4、纯度检查 多糖的纯度只代表某一多糖的相似链长的平均分布,通常所说的多糖纯品也是指具有一定分子量范围的均一组分。 多糖纯度的鉴定通常有以下几种方法: （1）常压凝胶层析法 凝胶层析法是根据在凝胶柱上不同分子量的多糖与洗脱体积成一定关系的特性来进行的。 选择适宜的凝胶是取得良好分离效果的保证。 2021/9/12 * （2）高效凝胶渗透色谱法 HPLC法具有快速、高分辨率和重现性好的优点,因此得到越来越多的应用。 用于HPLC的凝胶柱均为商品柱,其填料有疏水性的,也有亲水性的,而且每根柱的孔径不同,分离分子量的范围亦不同。 选用哪一种性质的填料和用多大的排阻限和渗透限,主要取决于被分离溶质的性质和可能的分子量大小。 多糖的检测不采用柱后衍生化方法,而是采用直接检测。 2021/9/12 * （3）比旋度法 不同的多糖具有不同的比旋度,在不同浓度的乙醇中具有