细胞培养技术入门.pptx

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文档介绍

◆ 在细胞培养中注意的一些问题◆ 细胞培养的实验程序◆ 细胞的复苏 ◆ 细胞的计数 ◆ 细胞(贴壁)的传代培养? ◆ 细胞的冻存◆ 悬浮细胞的培养方法 在细胞培养中注意的一些问题 环 境 由于体外培养细胞没有抗感染能力,若实验者粗心大意,技术操作不规范,也会导致污染。因而,每一项工作都必须做到有条不紊和完全可靠,特别是实验环境更为重要。 1.培养室和超净台的消毒 ★ 培养室 无菌培养室每天都要用速消净或0.2%的新洁而灭(苯扎溴铵)拖洗地面一次(拖布要专用),紫外线照射消毒30~50min。★ 超净工作台 台面每次实验前要用 75%酒精擦洗,然后紫外线消毒30 min。消毒时工作台面上用品不要过多或重叠放置,否则会遮挡射线,降低消毒效果。一些操作用具如移液器、废液缸。污物盒、试管架等用75%酒精擦洗后置于台内同时紫外线照射消毒。在工作台面消毒时切勿将培养细胞和培养用液同时照射紫外线。2. 培养前准备 在开始实验前要制定好详细的实验计划和操作程序,有关数据的计算要事先做好。根据实验要求,准备各种所需器材和物品、清点无误后将其放置到培养室、超净台内,然后开始消毒。这样可以避免开始实验后,因物品不全往返拿取而增加污染机会。3. 培养条件 ★ 气体环境:95%空气加5%CO2混和气体环境中。 ★ PH值:7.2~7.4 ★ 温度:37℃ 培养实验用品的前期处理1.清洗和浸泡:(1)玻璃器皿:新的玻璃器皿在生产过程中常使玻璃表面呈碱性,并带有一些如铅和砷等对细胞有毒的物质,使用前必须彻底清洗。首先用自来水初步刷洗,5%稀盐酸溶液中浸泡过夜。然后用流水彻底冲洗3-5遍,单蒸馏水漂洗3遍,三(双)蒸水漂洗2遍,烘干备用。 (2)塑料器皿:塑料器皿经冲净后,晾干,用2%NaOH浸泡过夜,自来水冲洗,5%盐酸浸泡30min,流水彻底冲洗3-5遍,单蒸馏水漂洗3遍,三(双)蒸水漂洗2遍,烘干备

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