病毒的血凝抑制试验操作.ppt

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文档介绍

仪器及材料 pH7.2PBS或生理盐水、1%鸡RBC悬液、新城疫病毒液 新城疫待检血清 新城疫标准阳性血清、新城疫标准阴性血清 微量血凝板(V型96孔)、微量移液器、吸头 微型振荡器、温箱、注射器 4单位病毒(4V)的配制 HA价除以4即为4V抗原的稀释倍数。假设HA价为256,则4V抗原的稀释倍数为64,吸取1mL抗原加入63mL生理盐水即为4V抗原。 被检血清的制备 静脉或心脏采血(不加抗凝剂),血液凝固后自然析出或离心得到的淡黄色液体即为被检血清。 孔 号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 生理盐水 被检血清 血清稀释倍数 4V 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 50 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 -  - 弃25 21 2 2 23 24 25 26 27 28 29 210 病毒 盐水 对照 对照 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 - 轻叩反应板使反应物混合均匀,室温即20℃~25℃下静置不少于30min,4℃静置不少于60min。 1%RBC悬液 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 振荡混匀,室温即20℃~25℃下静置40min后观察结果。若环境温度太高,放4℃静置60min。生理盐水对照孔红细胞成明显钮扣状沉到孔底时判定结果。 操作术式(微量法,单位ul) 注意:除被检血清外,标准阳性和标准阴性血清各做一排。 结果判定的条件 生理盐水对照孔红细胞成明显钮扣状沉到孔底时判定结果。 只有当阴性血清与标准抗原对照的HI滴度不大于2log2,阳性血清与标准抗原对照的HI滴度与已知滴度相差在1个稀释度范围内,并且所用阴、阳性血清都不发生自凝的情况下,HI试验结果方判定有效。 HI试验结果及规律 完全不凝集:红细胞呈明显钮扣

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