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重组DNA技术中常用的其他工具酶类

　在重组DNA技术中，常需要一些基本工具酶进行基因操作。例如，对目的基因进行处理时，须利用序列特异性的限制性核酸内切酶在准确的位置切割DNA，使较大的分子成为一定大小的DNA片段。构建重组DNA分子时，必须在DNA连接酶的作用下，才能使目的基因片段与载体连接。此外，还有一些工具酶也是重组DNA时必不可少的。

　一、限制性核酸内切酶

　(一)、核酸酶概念与分类：

　核酸酶分为两类：核酸外切酶(exonuclease)是从核酸的一端开始，一个接一个把核苷酸水解下来；核酸内切酶(endonuclease)则从核酸链中间水解3’-5’磷酸二酯键，将核酸链切断。很多细菌和细胞都能识别外来的核酸并将其分解，1962年发现这是由于细菌中含有特异的核酸内切酶，能识别特异的核酸序列而将核酸切断；同时在细菌体内还伴有特定的核酸修饰酶，最常见的是甲基化酶(methlase),能使细胞自身核酸特定序列上的碱基甲基化，从而避免受内切酶水解，外来核酸没有这种特异的甲基化修饰，就会被细胞的核酸酶所水解。这样细胞就构成了限制-修饰体系(restriction modification system)，其功能就是保护自身的DNA，分解外来的DNA，以保护和维护自身遗传信息的稳定，这对细菌的生存和繁衍具有重要意义。这就是限制性内切酶中“限制”二字概念的由来。

　(二)、限制性核酸内切酶的概念与分类

　限制性核酸内切酶是一类专门切割DNA的酶，它们能特异的结合一段被称为是限制性内切酶识别序列的DNA序列，并切割双链DNA。

　限制性核酸内切酶可分为3种类型。Ⅰ型和Ⅲ型限制酶在同一蛋白质分子中兼有修饰(甲基化)作用及依赖ATP的限制(切割)活性。

　Ⅲ型限制酶在识别位点上切割DNA，然后从底物上解离。