靶向peroxiredoxinⅰ基因的shrna真核表达载体构建及生物学.doc

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文档介绍

靶向PeroxiredoxinⅠ基因的shRNA真核表达载体构建及生物学功能鉴定

郭启帅基金项目：国家自然科学基金资助项目.作者简介：郭启帅，男，博士研究生，主治医师，

基金项目：国家自然科学基金资助项目.

作者简介：郭启帅，男，博士研究生，主治医师，从事肿瘤基因治疗研究，电话E-mail:guoqis@sohu.com

通信作者：李少林，电话：（023E-mail: shaolinli202@sina.com

(重庆医科大学放射医学教研室,重庆 400016；重庆市合川区人民医院肿瘤科，重庆 401520)

[摘 要]： 目的 构建针对PeroxiredoxinⅠ(PrxⅠ)基因的shRNA真核表达载体，观察下调PrxⅠ基因表达后对乳腺癌MCF-7细胞生物学功能的影响。方法 构建针对PrxⅠ基因的shRNA真核表达载体，经酶切和测序鉴定正确后，转染入乳腺癌MCF-7细胞。流式细胞术检测细胞转染效率，RT-PCR及Western blot分别检测干扰前后PrxⅠ mRNA和蛋白表达，MTT法及流式细胞术检测干扰前后乳腺癌MCF-7细胞体外的增殖情况及细胞周期和细胞凋亡。结果 成功构建真核表达载体pGPU6-HK、pGPU6-Prx1、pGPU6-Prx2、pGPU6-Prx3、pGPU6-Prx4，并转染入乳腺癌MCF-7细胞中，转染率为80％左右，RT-PCR及Western blot分析表明转染pGPU6-Prx1、pGPU6-Prx2、pGPU6-Prx3、pGPU6-Prx4后的细胞EGFR mRNA和蛋白表达均不同程度地受抑，以pGPU6-Prx3为甚，其mRNA和蛋白表达抑制率分别为82.6％和80.5％。与未转染组和pGPU6-HK组相比，pGPU6-Prx3组的细胞生长明显延迟 ( P＜0.05)，细胞凋亡率显著增加，G1 期细胞明显增多，而S期细胞减少(

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