靶向peroxiredoxinⅰ基因的shrna真核表达载体构建及生物学.doc

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文档介绍

靶向PeroxiredoxinⅠ基因的shRNA真核表达载体构建及生物学功能鉴定

郭启帅基金项目:国家自然科学基金资助项目.作者简介:郭启帅,男,博士研究生,主治医师,

基金项目:国家自然科学基金资助项目.

作者简介:郭启帅,男,博士研究生,主治医师,从事肿瘤基因治疗研究,电话E-mail:guoqis@sohu.com

通信作者:李少林,电话:(023E-mail: shaolinli202@sina.com

(重庆医科大学放射医学教研室,重庆 400016;重庆市合川区人民医院肿瘤科,重庆 401520)

[摘 要]: 目的 构建针对PeroxiredoxinⅠ(PrxⅠ)基因的shRNA真核表达载体,观察下调PrxⅠ基因表达后对乳腺癌MCF-7细胞生物学功能的影响。方法 构建针对PrxⅠ基因的shRNA真核表达载体,经酶切和测序鉴定正确后,转染入乳腺癌MCF-7细胞。流式细胞术检测细胞转染效率,RT-PCR及Western blot分别检测干扰前后PrxⅠ mRNA和蛋白表达,MTT法及流式细胞术检测干扰前后乳腺癌MCF-7细胞体外的增殖情况及细胞周期和细胞凋亡。结果 成功构建真核表达载体pGPU6-HK、pGPU6-Prx1、pGPU6-Prx2、pGPU6-Prx3、pGPU6-Prx4,并转染入乳腺癌MCF-7细胞中,转染率为80%左右,RT-PCR及Western blot分析表明转染pGPU6-Prx1、pGPU6-Prx2、pGPU6-Prx3、pGPU6-Prx4后的细胞EGFR mRNA和蛋白表达均不同程度地受抑,以pGPU6-Prx3为甚,其mRNA和蛋白表达抑制率分别为82.6%和80.5%。与未转染组和pGPU6-HK组相比,pGPU6-Prx3组的细胞生长明显延迟 ( P<0.05),细胞凋亡率显著增加,G1 期细胞明显增多,而S期细胞减少(

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