文档介绍
Sanger测序技术原理 第二代测序技术原理 第三代测序技术原理 第二代测序技术小结 454测序仪： 454测序仪使用的方法，经微乳液PCR发扩增后，携带有大量模板分子的微珠被放置到芯片上的微孔中。随后使用焦磷酸法测序，每一轮测序反应都会掺入一个核苷酸，随后加入反应试剂荧光素和腺苷酰硫酸。这样在每一个小孔中每当有聚合酶将核苷酸掺入到模板上都会发光。最后用腺苷三磷酸双磷酸酶洗涤去掉多余的核苷酸。 (对重复序列如poly A的测定不准确，因荧光信号具有累加效果) Solexa测序仪：Solexa测序仪使用桥式PCR直接在芯片进行模板扩增，然后同时加入四种经过修饰的脱氧核苷酸，每一个核苷酸都携带一种荧光集团和一个可被去除的终止基团。经过修饰的DNA聚合酶催化引物延伸测序反应。采集图像、然后切除荧光标记基团和终止基团，重复上述反应，完成测序。（边合成边测序） Solid测序仪：Solid测序仪使用微乳液PCR法扩增模板片段，然后吸附有大量扩增片段的直径1um的磁珠倍制成高密度测序芯片，借助使用连接酶而不是聚合酶测序法完成测序。在solid测序一中，每一次反应都会在引物末端加上一个荧光标记的8bp的探针，在探针中央的两个碱基上标记有荧光基团，探针被连接上之后发出荧光，随后荧光基团部分被切除，重新系下一轮反应。（边连接边测序） Current popular sequencing platform 斯坦福大学的科学家最近利用Helicos Biosciences的Heliscope单分子测序仪，对一名白人男子的基因组进行了测序，文章发表在最新一期的《Nature Biotechnology》在线版上。利用一台Heliscope测序仪和4次数据收集运行，完成了此次测序。 研究人员报告称，他们产生了数十亿个Heliscope序列读取，覆盖了90%的人参考基因组，覆盖度达28倍。序列读长为2