文档介绍
将制好的玻片置于显微镜下,首先观察标本的制备效果,检验操作过程是否正确。一般来说,制得好的标本应是细胞多、颜色为紫红色。此时间期细胞由于低渗和固定处理,细胞膜和质已被去掉,镜下看到的仅为膨胀后呈圆形的细胞核。分裂期细胞染色体集中在一起,其外也无细胞膜包裹,染色体之间无重叠,易分辨,臂的长度适中。但最重要的是分裂相要多。分裂相的多少主要取决于秋水仙素的用量和时间。秋水仙素还影响染色体的形态,如用量过大,常使染色体过于缩短,不利于观察。 小白鼠的染色体数目(2n)为40条,但全部为端着丝粒染色体,大小区别不明显,较难分组编号,一般为“U”、“V”形 秋水仙素用量要注意,太多或处理时间过长,会导致染色体的过分凝缩或着丝点裂解,最终会引起染色体形态不正常,甚至被破坏或溶解。低渗处理很关键。低渗液的量、处理时间均与细胞的数量有关。低渗过度,细胞会破裂;低渗不足则染色体在一起,分散不开。4) 离心速度或离心时间也能影响染色体标本的制备。离心速度过大或离心时间过长,则会引起细胞破裂;反之,离心速度过小或离心时间过短,则细胞沉降不下来,则会引起大量细胞的丢失。5) 固定液要随用随配,固定彻底后再打散细胞团块,否则细胞容易破碎,染色体分散亦受到影响。6) 载玻片要预冷.冷却不够,则会影响染色体的附着和铺展。7) 用吸管吹散细胞时用力必须尽量轻柔,用力过大则会造成细胞破裂,而染色体也会弥散在溶液中,在随后的离心中将会丢失。8) 滴片时的高度很重要,高度过低细胞不会破裂;过高则染色体过于分散甚至丢失,无法辨别出染色体的准确数量。 把动物细胞置于低渗液(如低浓度的KCl溶液或蒸馏水)中,使动物组织细胞充分吸水膨胀,染色体分散,平整地铺展在载玻片上,再用火焰干燥让染色体紧贴在载玻片上。这就是低渗火焰干燥法。此法有效地克服了压片法中存在的染色体分散不开、平展不良等的不足 预固定:终止低渗;