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生物工艺学 2 菌种选育(4) 主要内容 菌种选育 自然选育 诱变育种 抗噬菌体菌株的选育 杂交育种 原生质体融合技术 DNA重组技术 菌种保藏 2.2.6 DNA重组技术 概述 基因工程（genetic engineering） ：在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出所需要的基因产物（70年代，基于DNA限制新性内切酶、DNA连接酶的发现） 。 基因工程主要包括两个步骤： 获得目的基因，取得基因的载体，使二者进行体外重组。 将重组的DNA转化到受体的活细胞中去，改变受体细胞的遗传特性。 基因工程过程示意图 基因工程过程流程图 限制性内切酶 分布：主要在微生物中。 特点：特异性，即识别特定核苷酸序列，切割特定切点。 结果：产生黏性未端（碱基互补配对）。 举例：大肠杆菌的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切割点上将DNA 分子切断。目前已发现的限制酶有200多种。 DNA连接酶 连接酶的作用：将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子。 连接的部位：磷酸二酯键，不是氢键。 DNA连接酶的作用过程 DNA连接酶的作用过程 运载体 作用：将外源基因送入受体细胞。 条件： 能在宿主细胞内复制并稳定地保存。 具有多个限制酶切点。 具有某些标记基因 种类：质粒、噬菌体和动植物病毒。 质粒的特点 质 粒 （一）目的基因的获取 1. 化学合成法 用于已知序列，或可推导出序列的基因 2. 基因组DNA 基因组DNA文库（genomic DNA library） 3. cDNA cDNA文库（cDNA library） 4. 聚合酶链反应（polymerase chain r